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His-tag的由來

組氨酸標(biāo)簽也稱His-tag，是一種簡單、應(yīng)用廣泛的純化標(biāo)簽，具有六個或更多連續(xù)的組氨酸殘基，其可插入目的蛋白的C末端或N末端。一是能構(gòu)成表位利于檢測；二是構(gòu)成的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。His標(biāo)簽我們經(jīng)常會看到，做蛋白親和純化的小伙伴們應(yīng)該就沒有沒聽過His名號的吧。可是它究竟從何而來呢？一、起源1975年,J.Porath等人的研究論文中，實驗者將金屬螯合親和層析（簡稱MCAC）技術(shù)應(yīng)用于蛋白分離。研究者首先將金屬離子（如Cu2+、Ni2+等）固定到IDA-衍生的凝膠...

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怎么預(yù)防細(xì)胞污染？

一、前言經(jīng)常做實驗的小伙伴都知道，從事細(xì)胞培養(yǎng)工作時都有可能面臨細(xì)胞受到污染的境況。對于細(xì)胞的受污染問題，最為緊要的在于防范，因為一旦細(xì)胞受到污染，欲挽回已十分艱難，即便成功挽回，細(xì)胞的狀態(tài)亦會受損，進(jìn)而對實驗結(jié)果造成影響。因此，讓我們首先探討一下如何有效地進(jìn)行預(yù)防。生物安全柜是細(xì)胞處理的主要場所，而培養(yǎng)箱是細(xì)胞生長的主要場所，所以細(xì)胞污染通常就發(fā)生在這兩個地方。那么在使用生物安全柜和培養(yǎng)箱時如何做好預(yù)防措施呢？二、措施1.所有進(jìn)入安全柜的東西都要盡可能保證無菌如果實驗室條件...

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Millipore超濾離心管操作步驟

一、Millipore密理博超濾離心管0.5ml簡介Millipore密理博超濾離心管0.5ml，即Amicon@Ultra-0.5超濾離心管，具有快速超濾功能，能夠達(dá)到較高的濃縮倍數(shù)，輕松實現(xiàn)從稀釋和復(fù)雜的混和樣本中濃縮回收目的產(chǎn)物。垂直設(shè)計的超濾膜以及較大的有效濾膜表面積有助于快速的樣本處理，獲得較高的樣本回收率(通常90%),并達(dá)到30倍的濃縮。根據(jù)標(biāo)稱分子量限值(NMWL)的不同，典型處理時間為10-30分鐘。超濾膜的垂直設(shè)計也降低了溶質(zhì)極化造成的濾膜結(jié)垢；過濾管的死...

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一文了解WB-BCA法

一、BCA法的原理BCA法又被稱為Smith法，是由Pierce公司的PaulK.Smith等人在1985年對Lowry法進(jìn)行改進(jìn)，提出用BCA代替Folin-酚試劑而建立的（Smith,P.K.,etal.Measurementofproteinusingbicinchoninicacid.AnalBiochem.1985,150:76-85.）。該方法的原理是，在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與Cu2+絡(luò)合，同時將Cu2+還原為Cu+，BCA螯合Cu+形成紫色絡(luò)合物，測定56...

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ELISA檢測方法

ELISA檢測方法一、elisa直接法直接ELISA法是將抗原固定在96孔板上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測抗原。直接ELISA實驗步驟少，檢測速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應(yīng)，測定結(jié)果不容易出錯。但是由于直接ELISA的抗原通過吸附而不是特異性固定的，樣本中的所有蛋白質(zhì)(靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白)都會固定在96孔板上，導(dǎo)致背景比較高。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要標(biāo)記與其特異性結(jié)合的一抗，實驗顯得不太靈活。另外由于沒有使用二抗，沒有放大作用，降低了測定的靈敏度。優(yōu)點：實驗步驟...

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