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分子實(shí)驗(yàn)中DNA連接酶的作用原理

DNA連接酶(DNAligases)是一類(lèi)重要的酶，在DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它們的主要功能是連接DNA鏈上的磷酸二酯鍵，形成完整的DNA雙鏈。這一過(guò)程對(duì)于維持基因組的完整性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。DNA連接酶的基本作用原理是通過(guò)催化DNA鏈的連接，以形成連續(xù)的磷酸二酯骨架。連接過(guò)程通常包括以下三個(gè)步驟：（1）底物識(shí)別DNA連接酶識(shí)別DNA分子中需要連接的兩個(gè)斷裂部位(通常是5'末端和3'末端)。（2）磷酸基團(tuán)的激活在連接前，DNA連接酶通常需要結(jié)合ATP(腺苷三...

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抗體抗原測(cè)定的Elisa方法

在醫(yī)學(xué)臨床、生物學(xué)研究上，用于測(cè)定各種各樣的抗原、半抗原和抗體，Elisa法為雜交瘤細(xì)胞株的篩選提供了簡(jiǎn)便、靈敏、快速的測(cè)定方法。那讓我們一起來(lái)看看抗體抗原測(cè)定的Elisa方法吧！抗體抗原測(cè)定的Elisa方法一：直接法1、將抗原吸附在固相載體表面；2、添加一種封閉試劑，防止檢測(cè)抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合；3、添加直接偶聯(lián)某種酶（如HRP）的檢測(cè)抗體。該檢測(cè)抗體將結(jié)合抗原，并且剩余的抗體會(huì)從孔中洗掉；4、添加這種酶的底物；5、短暫孵育后，在酶標(biāo)儀上測(cè)定每個(gè)孔的信號(hào)?？贵w抗原測(cè)定的El...

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Elisa檢測(cè)之組織樣本的處理方法

Elisa是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定性定量分析方法。樣本的處理對(duì)于Elisa實(shí)驗(yàn)的成功起著關(guān)鍵的作用。組織樣本一般制成組織勻漿，處理方法如下：(1)使用干凈的工具解剖目標(biāo)組織，盡快置于冰上，以防被蛋白酶降解。（暫時(shí)不處理的組織，置于圓底微量離心管中，浸入液氮中“速凍”，在-80℃下存儲(chǔ)樣品備用）。(2)用預(yù)冷的PBS緩沖液（0.01M，pH=7.4）洗滌組織去除殘留的血液，稱(chēng)重后備用。若組織塊較大，需先剪碎。(3)在冰上用研磨緩沖液（常用PBS緩沖液，但最好使用50mMT...

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細(xì)胞培養(yǎng)到底選用培養(yǎng)瓶？培養(yǎng)皿？還是培養(yǎng)板？

細(xì)胞培養(yǎng)到底選用培養(yǎng)瓶？培養(yǎng)皿？還是培養(yǎng)板？這個(gè)問(wèn)題的答案是：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮托枰獊?lái)進(jìn)行選擇！來(lái)讓我們一起看看培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板的選擇吧！一、培養(yǎng)瓶如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖桥囵B(yǎng)原代細(xì)胞和常規(guī)的傳代細(xì)胞，一般選擇用培養(yǎng)瓶，可獲得大量實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞。培養(yǎng)瓶是通過(guò)表面積來(lái)命名的，例如T25、T75、T175，數(shù)字就是表面積，T25就是25cm2，T75就是75cm2，T1755就是175cm2。常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶分為一次性的塑料瓶和玻璃瓶，他們各有特色。玻璃瓶的優(yōu)點(diǎn)是：成本低、透光性強(qiáng)、可重復(fù)使...

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原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用及優(yōu)缺點(diǎn)

原代細(xì)胞保留了體內(nèi)組織的特性和功能，因此，原代細(xì)胞常被用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等，讓我們一起來(lái)看看原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用和優(yōu)缺點(diǎn)。一、原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用（1）藥理學(xué)和藥效學(xué)研究原代細(xì)胞培養(yǎng)可用于評(píng)估藥物對(duì)特定細(xì)胞類(lèi)型的作用和效果，更接近體內(nèi)情況，有助于篩選和優(yōu)化藥物。（2）癌癥研究原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)可以提供更準(zhǔn)確的癌癥模型，用于研究腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和治療反應(yīng)。（3）組織工程研究原代細(xì)胞可用于構(gòu)建組織工程支架或模擬器官的種子細(xì)胞，用于再生醫(yī)學(xué)和器官修復(fù)研究。二、原代細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)（1）保留了原代細(xì)胞...

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